Informations de base sur les lecteurs de plaques à fluorescence
Qu'est-ce qu'un lecteur de plaques en fluorescence ?
Un lecteur de plaques en fluorescence (autre nom : lecteur de microplaques en fluorescence) est un équipement capable de détecter et de quantifier les photons lumineux émis par un échantillon fluorescent présent dans une microplaque lors de l'excitation par une lumière à une longueur d'onde spécifique.
Les lecteurs de plaques en fluorescence sont généralement destinés à la détection de l'intensité de la fluorescence et du FRET. D'autres modes de détection basés sur la fluorescence, tels que la polarisation de la fluorescence ou la fluorescence résolue dans le temps et le TR-FRET, ne peuvent être détectés qu'occasionnellement et avec une faible sensibilité, voire pas du tout, par les lecteurs de microplaques en fluorescence monomodes. Pour couvrir également ces modes de détection, ainsi que l'absorbance et la luminescence, des lecteurs de microplaques multi-modes sont généralement nécessaires.
Les lecteurs de microplaques en fluorescence contiennent généralement une source de lumière, un système optique pour la sélection de la lumière d'excitation (c'est-à-dire des filtres et/ou des monochromateurs), un second système optique pour la sélection de la lumière d'émission et un détecteur, généralement un ou plusieurs tubes photomultiplicateurs (PMT). Ces derniers convertissent les photons générés par la fluorescence ou la luminescence en électricité qui est ensuite quantifiée par le lecteur de microplaques. Le résultat de ce processus est un nombre qui permet de quantifier un échantillon.
Contrairement à l'absorbance, la détection de la fluorescence n'est pas une mesure absolue. L'intensité du signal fluorescent est généralement relative à d'autres mesures ou à une mesure de réfence prise par un instrument. Par conséquent, les lecteurs de plaques de fluorescence mesurent le signal lumineux émis par un échantillon en unités fluorescentes relatives (RFU).
Les lecteurs de plaques en fluorescence sont disponibles en tant que lecteurs autonomes et dédiés ou, dans le cadre de lecteurs de microplaques multi-modes, lorsqu'ils sont combinés à la détection d'absorbance et/ou de luminescence.
Les lecteurs de plaques en fluorescence sont utilisés pour différents tests et applications dans divers domaines, tels que la recherche universitaire en sciences de la vie, la découverte et le criblage de médicaments, les laboratoires cliniques, la biologie synthétique et le contrôle de la qualité des aliments ou de l'eau.
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Si vous êtes sur le marché pour un nouveau lecteur de plaques en fluorescence (monomode ou multimode), il y a quelques facteurs à prendre en compte, car les performances de l'instrument peuvent affecter de manière significative la qualité des résultats de vos recherches.
Sensibilité
À des fins de quantification, les lecteurs de plaques en fluorescence offrent généralement une plus grande sensibilité que les lecteurs d'absorbance. Néanmoins, un lecteur de microplaques en fluorescence offrant une meilleure sensibilité fournira des données avec une meilleure statistique, moins de variabilité entre les répliques et un delta (distance) plus grand entre les échantillons répondants et non répondants. En outre, une meilleure sensibilité vous permettra de réduire la quantité de réactifs et/ou d'échantillons utilisés pour obtenir des résultats de bonne qualité et, par conséquent, de réduire les coûts de votre essai.
Gamme dynamique
Dans la détection de l'intensité de la fluorescence, les échantillons couvrent souvent une vaste gamme de concentrations. Les signaux qui doivent être mesurés sur un lecteur de plaques en fluorescence peuvent couvrir une large gamme d'intensités de signal - de faible à très forte. De plus, l'intensité du signal des échantillons issus d'essais cinétiques enzymatiques ou cellulaires est souvent difficile à prévoir, car le signal maximal s'accumule...
Dans ces cas, il peut être difficile d'acquérir tous les signaux en une seule mesure avec un seul réglage. Les échantillons très brillants peuvent saturer le détecteur de fluorescence du lecteur de microplaques. Les échantillons très sombres peuvent être indiscernables des blancs.
Une plage dynamique étendue permet à votre lecteur de plaques de fluorescence d'acquérir des échantillons très divergents en un seul passage, évitant ainsi le gaspillage de réactifs et de temps causé par de multiples mesures par tâtonnement pour trouver le bon rapport dilution/gain de fluorescence. La fonction de plage dynamique améliorée du PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus et du VANTAstar offre la plus grande plage dynamique possible.
Choix de la longueur d'onde
Les lecteurs de microplaques en fluorescence doivent obligatoirement être dotés d'une fonction de sélection de la longueur d'onde, tant pour l'excitation que pour l'émission. Cela permet de réduire le bruit de fond ou le bruit non spécifique qui est généralement causé par la diffusion de la lumière ou l'autofluorescence de l'échantillon et de la microplaque.
Des filtres ou des monochromateurs peuvent être utilisés à cette fin. Les filtres sont généralement plus sensibles, tandis que les monochromateurs offrent plus de flexibilité. Une exception à ce paradigme est le système de monochromateur à filtre variable linéaire (LVF) disponible sur le CLARIOstar Plus et le VANTAstar. Les monochromateurs LVF ont des performances similaires à celles des filtres et font du CLARIOstar Plus le lecteur de microplaques à monochromateur le plus sensible du marché. Les monochromateurs LVF peuvent être utilisés pour l'intensité de fluorescence et la luminescence. En outre, les monochromateurs ont la capacité d'acquérir des balayages d'excitation ou d'émission.
En outre, la possibilité de détecter simultanément deux canaux d'émission sur un lecteur de plaques de fluorescence est très utile pour les essais FRET. Cette option réduit de moitié le temps de mesure et la variabilité des données. La détection à double émission simultanée (SDE) est disponible sur le PHERAstar FSX et est une option sur le LUMIstar Omega et le FLUOstar Omega.
Formats de microplaques compatibles
Dans la recherche en sciences de la vie, les tests de fluorescence de base sont généralement mesurés dans des microplaques de 96 puits. Toutefois, si vous avez plusieurs échantillons et/ou si vous souhaitez économiser des réactifs ou du temps précieux, les formats 384 puits et 1536 puits peuvent également être utilisés. Assurez-vous simplement que le lecteur de microplaques en fluorescence de votre choix est également capable de lire le format de microplaque que vous prévoyez d'utiliser.
Injecteurs de réactifs
Lorsque vous recherchez un lecteur de plaques en fluorescence, vous devez tenir compte de la nature de l'essai que vous souhaitez réaliser. Pour les essais cinétiques enzymatiques ou les réactions cellulaires en temps réel, l'utilisation d'injecteurs de réactifs peut être bénéfique. En pipettant manuellement les réactifs dans les puits, vous risquez de perdre des données importantes de votre réaction. En particulier pour les réponses rapides, l'événement que vous recherchez peut être déjà passé avant que vous ne le détectiez. Nos lecteurs de plaques de fluorescence équipés d'injecteurs de réactifs peuvent simultanément injecter et détecter le signal d'un puits, puis passer au suivant.
Contrôle environnemental
Si votre recherche nécessite des essais de longue durée sur des cellules vivantes et que vous ne voulez pas faire des allers-retours entre le lecteur de microplaques en fluorescence et l'incubateur, assurez-vous que le lecteur de votre choix est capable de contrôler son environnement gazeux interne.
La série Omega, le VANTAstar et le CLARIOstar Plus peuvent être équipés de notre unité de contrôle atmosphérique (ACU). L'ACU fournit l'environnement idéal pour toute application avec des cellules vivantes. L'ACU régule indépendamment les niveaux de gaz O2 et CO2 dans la chambre du lecteur de microplaques. Combiné à l'agitation et à l'incubation de la température, l'ACU fournit une véritable solution "prête à l'emploi" pour tout essai à base de cellules, de la croissance cellulaire standard aux essais hypoxiques.
Logiciel de réduction des données
En général, le logiciel qui fait fonctionner le lecteur de microplaques est une partie très sous-estimée de l'ensemble. Pour certains lecteurs, le logiciel se contente de contrôler le processus de mesure et de fournir une sortie de données de dosage brutes. Dans d'autres cas, il peut effectuer des analyses complexes.
Un logiciel complet, facile à utiliser et flexible peut vous faciliter la vie, simplifier la détection et l'analyse des données afin que vous puissiez tirer le meilleur parti de votre instrument.
Les fonctions de calcul les plus utiles pour les tests de fluorescence comprennent la soustraction automatique du blanc, le calcul automatique des concentrations sur la base des courbes standard, et les constantes enzymatiques telles que Km et Vmax.
Nos lecteurs de plaques en fluorescence
Fluorescence intensity detection can be performed on the PHERAstar® FSX, CLARIOstar® Plus, VANTAstar and FLUOstar® Omega plate reader.
La détection de l'intensité de la fluorescence peut être effectuée sur le lecteur de plaques PHERAstar® FSX, CLARIOstar® Plus, VANTAstar et FLUOstar® Omega.
Tous nos lecteurs de microplaques en fluorescence sont équipés d'une lampe flash au xénon de haute intensité, de filtres spécifiques au dosage, de modules optiques ou de monochromateurs LVF™ (dépendant du lecteur), et de PMT à faible bruit ou à décalage vers le rouge étendu.
CLARIOstar Plus
VANTAstar
Omega Series
Quels essais peuvent être mesurés par un lecteur de plaques en fluorescence ?
L'intensité de la fluorescence est l'un des modes de détection les plus populaires dans les sciences de la vie. En conséquence, il existe une multitude de kits et de réactifs disponibles sur le marché pour les types de tests les plus divers que les lecteurs de microplaques en fluorescence, en tant qu'instruments monomodes ou multimodes, peuvent couvrir.
Les applications courantes de l'intensité de fluorescence sont la quantification de l'ADN/ARN, les tests de calcium (flux et signalisation), les activités enzymatiques, l'expression génétique, la signalisation des seconds messagers pour les RCPG, l'interaction protéine-acide nucléique, la quantification du tryptophane, les balises moléculaires, les biocapteurs pour l'analyse des eaux usées, etc.
Les applications cellulaires comprennent les tests d'apoptose, la prolifération cellulaire, l'efficacité de la transfection et la cytotoxicité.
L'interaction entre protéines peut être détectée par transfert d'énergie par résonance de fluorescence (FRET). Le FRET est un test de détection de fluorescence à double colorant basé sur le transfert d'énergie entre un donneur et un accepteur. Si le donneur et l'accepteur sont à proximité (10-100 Å), l'excitation du fluorophore du donneur transfère l'énergie au fluorophore de l'accepteur qui émettra de la lumière sans être directement excité.
Exemples de mesures d'intensité de fluorescence/FRET :
Voici des exemples de mesures d'intensité de fluorescence et de FRET effectuées sur des lecteurs de plaques en fluorescence BMG LABTECH :
- AN 301: Simultaneous detection of GPCR second messengers in living cells
- AN 293: Moss cells as expression system for biopharmaceuticals
- AN 253: Real-time calcium flux measurements in iPSC derived 3D heart tissue
Voir la liste complète des notes d'application sur l'intensité de fluorescence.
Pourquoi choisir un lecteur de plaques en fluorescence BMG LABTECH ?
BMG LABTECH est spécialisé dans la production de lecteurs de microplaques uniquement et apporte plus de 30 ans d'expertise complète dans la technologie de lecture de plaques. Cette connaissance est visible dans les résultats que nos instruments fournissent - le seul facteur qui compte dans votre laboratoire ! Les utilisateurs de BMG LABTECH peuvent avoir confiance pour obtenir les meilleurs résultats en termes de sensibilité, de vitesse et de flexibilité. De plus, nos lecteurs de microplaques multi-modes sont développés pour fournir des performances optimales pendant des années. Nos instruments sont développés, produits et testés en Allemagne et sont construits pour être extrêmement robustes et fiables.
Achetez uniquement ce dont vous avez besoin
Grâce à leur modularité, tous nos lecteurs de plaques en fluorescence peuvent être équipés de différents modes de détection et couvrir une multitude d'applications. Des fonctionnalités supplémentaires peuvent être mises à niveau à tout moment. Vous avez ainsi la possibilité de garder vos options ouvertes, même si vous n'utilisez pas d'emblée toutes les possibilités de votre lecteur de microplaques.
Un service et un support complets
Nous nous efforçons de vous fournir le meilleur service clientèle possible. Tous les représentants des zones de vente sont des spécialistes techniques hautement qualifiés, capables de répondre aux questions relatives au matériel, aux logiciels et à la plupart des applications. Pour les solutions d'applications les plus complexes, une équipe de spécialistes des applications est également disponible.
Logiciels multi-utilisateurs
Tous nos instruments sont livrés avec un logiciel multi-utilisateurs qui peut être installé sur autant d'ordinateurs que les utilisateurs le souhaitent, sans qu'il soit nécessaire d'acheter des licences. Les mises à jour du logiciel de nos lecteurs de microplaques sont gratuites pendant les 12 premiers mois suivant l'achat.