Que faut-il prendre en compte lors du choix d'un lecteur de plaques en luminescence ?
PHERAstar FSX
Le meilleur et le plus sensible lecteur de plaque HTS
Informations de base sur les lecteurs de plaques en luminescence
Un lecteur de plaques en luminescence (autres noms : lecteur de microplaques en luminescence) est un équipement capable de détecter les photons lumineux émis par les réactions chimiques, biochimiques ou enzymatiques dans une microplaque et de les quantifier. La détection de la luminescence n'est pas une mesure absolue, comme l'absorbance. L'intensité du signal est généralement relative à d'autres mesures ou à une mesure de référence prise par un instrument (comme dans le cas de la fluorescence). Par conséquent, les lecteurs de plaques à luminescence quantifient le signal lumineux émis par un échantillon en Unités de Lumière Relative (ULR).
Qu'est-ce qu'un lecteur de plaques en luminescence ?
Les lecteurs de plaques en luminescence sont des instruments assez simples, optiquement parlant, par rapport aux lecteurs de plaques à fluorescence. En raison de la nature du signal luminescent, les lecteurs de microplaques en luminescence ne nécessitent ni source de lumière d'excitation, ni optique pour la sélection de la longueur d'onde d'excitation (comme cela est nécessaire pour la détection de l'absorbance ou de la fluorescence). Ils nécessitent simplement une chambre de lecture, un système optique pour amener le signal lumineux de l'échantillon au détecteur, un détecteur (tube photomultiplicateur, PMT) et éventuellement un système optique pour la sélection des longueurs d'onde de luminescence (émission).
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Si vous êtes à la recherche d'un nouveau lecteur de plaques en luminescence, vous devez tenir compte de certains facteurs, car les performances de l'instrument peuvent affecter de manière significative la qualité des résultats de vos analyses.
Sensibilité
La luminescence est généralement générée par une réaction biochimique ou chimique et ne nécessite pas de lumière d'excitation. Par conséquent, elle offre généralement une plus grande sensibilité par rapport à l'absorbance ou à la fluorescence. Le signal de fond ou de bruit non spécifique est extrêmement limité par rapport à l'intensité de la fluorescence, car il n'existe pas de processus d'excitation susceptible de déclencher une diffusion de la lumière ou une autofluorescence à partir de l'échantillon et de la microplaque.
Néanmoins, un lecteur de microplaques en luminescence avec une meilleure sensibilité fournira des données avec une meilleure statistique, moins de variabilité entre les répliques, et un delta (distance) plus grand entre les échantillons qui répondent et ceux qui ne répondent pas. En outre, une meilleure sensibilité vous permettra de réduire la quantité de réactifs et/ou d'échantillons utilisés pour obtenir des données de bonne qualité et, par conséquent, d'obtenir des résultats plus fiables.
Gamme dynamique
Les réactions luminescentes dans les microplaques sont généralement basées sur l'ajout d'un substrat dans les puits pour déclencher une réaction enzymatique. Une fois que la réaction est lancée et que la quantité de substrat est métabolisée par l'enzyme, la réaction est épuisée et ne peut plus être redéclenchée, à moins que de nouveaux réactifs et échantillons ne soient utilisés dans une nouvelle microplaque. Par conséquent, il est impératif d'acquérir le signal de tous les échantillons qui doivent être mesurés en une seule fois sur une microplaque avec un lecteur de plaques à luminescence. Cela évite le risque de devoir répéter l'essai et de consommer davantage de réactifs.
Si vous avez des échantillons couvrant une large gamme d'intensités de signal sur une seule microplaque, il peut être difficile de tous les acquérir en une seule mesure avec un seul réglage. Les échantillons très brillants peuvent saturer le détecteur de luminescence du lecteur de microplaques. Les échantillons très faibles peuvent être indiscernables des blancs.
Une plage dynamique étendue permet à votre lecteur de plaques de luminescence d'acquérir des échantillons très divergents en un seul passage sur une seule microplaque, évitant ainsi le gaspillage de réactifs et de temps causé par de multiples mesures par tâtonnement pour trouver le bon rapport dilution-gain-temps d'intégration. La fonction de plage dynamique améliorée sur le PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus et le VANTAstar offre les avantages suivants.
Sélection de la longueur d'onde
Une capacité de sélection des longueurs d'onde (filtres ou monochromateurs) dans les lecteurs de plaques de luminescence n'est pas obligatoire (comme pour la détection de l'absorbance ou de la fluorescence), en particulier lors de la détection de tests luminescents de base. Cependant, en fonction de l'application, et notamment pour les tests luminescents à signaux multiples, la possibilité de sélectionner les longueurs d'onde d'émission est bénéfique. Des filtres ou des monochromateurs peuvent être utilisés à cet effet. Cette option est utile lors du développement de nouveaux tests ou de la détection de signaux luminescents multiples. En outre, elle permet d'optimiser les tests en réduisant le bruit de fond.
Les filtres sont généralement plus sensibles, tandis que les monochromateurs offrent plus de flexibilité. Une exception à ce paradigme est le système de monochromateur LVF (Linear Variable Filter)TM disponible sur le CLARIOstar Plus et le VANTAstar. Les monochromateurs LVF ont des performances similaires à celles d'un filtre et font du CLARIOstar Plus le lecteur de microplaques à monochromateur le plus sensible du marché. Les monochromateurs LVF peuvent être utilisés pour la détection de l'intensité de la fluorescence et de la luminescence. De plus, les monochromateurs ont la capacité d'acquérir des scans de luminescence.
En outre, la possibilité de détecter simultanément deux canaux d'émission sur un lecteur de plaques en luminescence est très utile pour les essais BRET et NanoBRET. Cette option permet de diviser par deux le temps de mesure et de réduire la variabilité des données. La détection à double émission simultanée (SDE) est disponible sur le LUMIstar Omega et sur le PHERAstar FSX.
Formats de microplaques compatibles
En général, les tests de luminescence de base sont mesurés dans des plaques à 96 puits. Toutefois, si vous avez plusieurs échantillons et/ou si vous souhaitez économiser des réactifs ou du temps précieux, les formats 384 puits et 1536 puits peuvent également être utilisés. Assurez-vous simplement que le lecteur de plaques de luminescence de votre choix est également capable de lire le format de microplaque que vous prévoyez d'utiliser. De plus, la détection par absorption, fluorescence et luminescence nécessite différents types de plaques. La diaphonie lumineuse doit également être prise en compte lors de l'utilisation de microplaques à haute densité.
Diaphonie lumineuse
La diaphonie se produit lorsque, pendant la mesure d'un puits, le signal lumineux du ou des puits voisins sur une microplaque est également capté par le détecteur. Cela conduit à des résultats faussés. La diaphonie est un facteur particulièrement important lorsque l'on travaille avec des plaques à haute densité (384 puits et plus). La lumière de la diaphonie peut être captée par le détecteur de deux manières, soit par le haut du puits, soit par la paroi en plastique de la microplaque.
Les lecteurs de plaques en luminescence haut de gamme tels que le CLARIOstar Plus, le VANTAstar et le PHERAstar FSX peuvent compenser ce facteur en bloquant physiquement la lumière provenant des puits voisins. Des algorithmes spécifiques peuvent calculer la quantité de lumière transmise à travers la paroi en plastique et la soustraire de vos échantillons.
Réactions de flash ou de lueur
Lorsque vous recherchez un lecteur de plaque en luminescence, vous devez tenir compte de la nature des tests que vous souhaitez réaliser. En fonction de leur cinétique, les tests luminescents peuvent être divisés en réactions flash et luminescentes. La luminescence flash est une réaction de courte durée qui émet un signal très brillant pendant un temps très court, généralement quelques secondes. La luminescence lumineuse a une durée de vie plutôt longue. La réaction peut durer plusieurs minutes, mais émet généralement un signal moins intense.
Tout lecteur de plaque en luminescence peut détecter les réactions lumineuses. Les essais flash nécessitent plutôt l'utilisation d'injecteurs de réactifs. En pipettant manuellement les réactifs dans les puits d'une microplaque, vous risquez de perdre le pic de votre réaction, car le signal à courte durée de vie peut déjà être épuisé avant que vous ne le détectiez. Nos lecteurs de plaques en luminescence équipés d'injecteurs de réactifs peuvent injecter et détecter automatiquement le signal d'un puits, puis passer au suivant.
Les injecteurs de réactifs sont également utiles pour les tests DLR (Dual Luciferase Reporter). Ici, l'activité de deux luciférases est mesurée séquentiellement à partir d'un seul échantillon par un lecteur de plaques à luminescence et rend compte de la transcription d'un gène d'intérêt et d'un contrôle de transfection. Les deux tests peuvent être réalisés en 4 secondes environ à l'aide de lecteurs de plaques à luminescence équipés d'injecteurs de réactifs.
Nos lecteurs de plaques en luminescence
La détection de la luminescence peut être effectuée sur le lecteur de plaques en luminescence dédié de BMG LABTECH, le LUMIstar® Omega, et sur des lecteurs de microplaques multimodes, notamment le PHERAstar® FSX, le CLARIOstar® Plus, le VANTAstar® et le FLUOstar® Omega.
Tous nos lecteurs de plaques en luminescence sont certifiés pour les tests de report de la double luciférase. Ils utilisent un PMT (tube photomultiplicateur) à faible bruit optimisé pour la luminescence et peuvent être équipés d'injecteurs de réactifs de haute précision.
CLARIOstar Plus
Le lecteur de plaque le plus flexible pour le développement de vos tests
VANTAstar
Une gamme de lecteurs de microplaques monomodes et multi-modes évolutive
Omega Series
Une gamme de lecteurs de microplaques monomodes et multi-modes évolutive
Quelles analyses peuvent être mesurées par un lecteur de plaques en luminescence ?
Les lecteurs de plaques en luminescence, qu'il s'agisse d'instruments monomodes ou multimodes (incluant par exemple la détection de l'absorbance et de la fluorescence), peuvent couvrir une large gamme de tests, y compris les réactions enzymatiques, le gène DLR (Dual Luciferase Reporter), le flux de calcium luminescent et les tests ELISA chimioluminescents.
Les lecteurs de plaques en luminescence sont également utiles pour analyser la viabilité cellulaire, les tests de cytotoxicité et d'apoptose, les voies de signalisation et le métabolisme. La contamination des cellules par les mycoplasmes peut également être mesurée par des tests de luminescence.
Même les essais de proximité ou d'interaction protéine-protéine peuvent être mesurés par les essais BRET et nanoBRET.
Le BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer) est un test de détection de luminescence à double rapporteur basé sur le transfert d'énergie de résonance entre un donneur bioluminescent et un accepteur fluorescent. Comme le donneur émet des photons par bioluminescence, l'excitation de la fluorescence est inutile.
Exemples de mesures de luminescence :
Voici des exemples de mesures de luminescence effectuées sur des lecteurs de plaques en luminescence BMG LABTECH :
- AN 300: Verifying SPARCL performance on the CLARIOstar equipped for reading at time of injection
- AN 271: Dual Luciferase Reporter (DLR) assay certification
- AN 266: Promega's multiplexed cell viability and apoptosis assays
Voir la liste complète des notes d'application sur la luminescence.
Pourquoi choisir un lecteur de plaques en luminescence BMG LABTECH ?
BMG LABTECH est spécialisé dans la production de lecteurs de microplaques uniquement et apporte plus de 30 ans d'expertise complète dans la technologie de lecture de plaques. Cette connaissance est visible dans les résultats que nos instruments fournissent - le seul facteur qui compte dans votre laboratoire ! Les utilisateurs de BMG LABTECH peuvent avoir confiance pour obtenir les meilleurs résultats en termes de sensibilité, de vitesse et de flexibilité. De plus, nos lecteurs de microplaques multi-modes sont développés pour fournir des performances optimales pendant des années. Nos instruments sont développés, produits et testés en Allemagne et sont construits pour être extrêmement robustes et fiables.
Achetez uniquement ce dont vous avez besoin
Grâce à leur modularité, tous nos lecteurs de plaques en fluorescence peuvent être équipés de différents modes de détection et couvrir une multitude d'applications. Des fonctionnalités supplémentaires peuvent être mises à niveau à tout moment. Vous avez ainsi la possibilité de garder vos options ouvertes, même si vous n'utilisez pas d'emblée toutes les possibilités de votre lecteur de microplaques.
Un service et un support complets
Nous nous efforçons de vous fournir le meilleur service clientèle possible. Tous les représentants des zones de vente sont des spécialistes techniques hautement qualifiés, capables de répondre aux questions relatives au matériel, aux logiciels et à la plupart des applications. Pour les solutions d'applications les plus complexes, une équipe de spécialistes des applications est également disponible.
Logiciels multi-utilisateurs
Tous nos instruments sont livrés avec un logiciel multi-utilisateurs qui peut être installé sur autant d'ordinateurs que les utilisateurs le souhaitent, sans qu'il soit nécessaire d'acheter des licences. Les mises à jour du logiciel de nos lecteurs de microplaques sont gratuites pendant les 12 premiers mois suivant l'achat.