Informações básicas sobre leitores de microplacas
O que é um Leitor de Microplacas?
Um leitor de microplacas é um instrumento de laboratório usado para medir reações químicas, biológicas ou físicas, propriedades e analitos dentro do poço de uma microplaca. Uma microplaca contém pequenos poços nos quais ocorrem reações separadas. Na microplaca, essas reações convertem a presença de um analito ou a progressão de processos bioquímicos em sinais ópticos. O leitor de microplacas detecta esses sinais e assim quantifica o parâmetro de interesse.
Os cientistas da area de ciências da vida e das indústrias farmacêuticas se esforçam para melhorar os processos laboratoriais de rotina e a eficiência usando produtos ou instrumentos capazes de economizar tempo. Um leitor de microplacas pode processar até 3.456 amostras em minutos ou mesmo segundos. Um leitor de placas ajuda a minimizar o tempo operacional e a economizar custos com reagentes, permitindo que os pesquisadores dediquem mais tempo à análise de dados e desenvovimento de novas ideias.
Para que serve um leitor de microplacas?
Um leitor de microplacas é usado para a quantificação de vários ensaios biológicos e químicos em uma microplaca. Atualmente, a disponibilidade de uma infinidade de kits de reagentes permite a utilização de um leitor de microplacas em diferentes campos e para diversas aplicações. Além da pesquisa biológica, celular, bioquímica, farmacêutica e descoberta de drogas, tanto em ambientes acadêmicos quanto industriais, os leitores de placas também são usados na descoberta de drogas, pesquisa ambiental e na indústria de alimentos ou cosméticos.
Princípio de funcionamento de um leitor de microplacas
Medidas baseadas em microplacas detectam sinais de luz produzidos por uma amostra, convertidos por uma amostra ou transmitidos através de uma amostra. No leitor de placas, o sinal é coletado por um detector, geralmente um tubo fotomultiplicador (PMT). Os PMTs convertem fótons em eletricidade que é quantificada pelo leitor de microplacas. O resultado desse processo é quantificado e exibido em tela.
Dependendo da natureza das mudanças do sinal óptico durante uma reação e, conseqüentemente, do modo de detecção, as amostras em uma microplaca podem precisar ser excitadas pela luz em comprimentos de onda específicos. Essa luz geralmente é fornecida por uma lâmpada de xenônio de banda larga. Para permitir a excitação da amostra apenas por comprimentos de onda específicos, a luz produzida pela lâmpada é selecionada por um filtro de excitação específico ou monocromador. Em leitores de microplacas, para aumentar a sensibilidade e especificidade, filtros ou monocromadores são igualmente empregados no lado da emissão/detecção. Estes são geralmente colocados entre a microplaca e o detector.
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Quais ensaios eu gostaria de fazer?
Quando um leitor de placas deve ser adquirido, já existem aplicações conhecidas que devem ser medidas. No entanto, faz sentido prestar mais atenção a esta questão para encontrar o leitor certo considerando aplicações futuras no laboratório. Por um lado, você terá que realizar ensaios básicos para quantificar biomoléculas, como ácidos nucléicos e proteínas, ou viabilidade celular. Para todas essas aplicações, estão disponíveis várias soluções baseadas em diferentes princípios, modos de detecção e sensibilidades. Portanto, é importante saber com antecedência o nome exato e o fornecedor do kit ou da química que deseja usar em seu leitor de placas. Por outro lado, existem milhares de testes que respondem a questões biológicas específicas. Pode haver soluções para problemas que você normalmente resolve com testes complicados, embora existam soluções mais simples baseadas em microplacas. Portanto, revisar seu trabalho diário de laboratório e coletar informações sobre como os colegas usariam os leitores de microplacas é uma etapa fundamental antes de comprar um leitor de placas. Como alternativa, você pode encontrar inúmeras sugestões sobre como um leitor de microplacas pode simplificar sua pesquisa em nossas "áreas de pesquisa".
Qual modo de detecção eu preciso para o meu ensaio?
Diferentes ensaios são detectados de forma diferente, embora possam responder à mesma questão biológica. Se você já identificou kits comerciais, encontrará o modo de detecção necessário no folheto do produto. Caso contrário, os modos de detecção que estão disponíveis em um leitor de microplacas e para que são normalmente usados são descritos abaixo.
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Absorbância
A absorbância mede quanta luz é perdida (absorvida) quando transmitida através de uma amostra. As moléculas geralmente absorvem a luz em um comprimento de onda específico e podem ser quantificadas medindo sua absorção. A capacidade de seleção de comprimento de onda é obrigatória em um leitor de microplaca de absorbância e pode ser obtida com filtros, monocromadores ou espectrômetros. As aplicações típicas que são lidas por um leitor de microplacas de absorção são:
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Intensidade de fluorescência (incl. FRET)
A fluorescência é a absorção da energia luminosa e sua transformação em luz de emissão, junto com energia cinética e calor. Uma vez que a luz emitida é mais baixa em energia do que a luz de entrada, a emissão é sempre de maior comprimento de onda. O processo de absorção de energia, conversão de energia e emissão de luz é rápido e ocorre em um intervalo de nanossegundos. Portanto, a detecção da intensidade de fluorescência ocorre da seguinte forma em um leitor de placas: excitação com luz em um comprimento de onda específico e detecção da emissão de luz em comprimento de onda mais alto aproximadamente ao mesmo tempo. A seleção do comprimento de onda é realizada através de filtros ou monocromadores. A intensidade da fluorescência é proporcional em relação à concentração de um fluoróforo e é, portanto, usada para quantificar moléculas fluorescentes (ou marcadas com fluorescência). Outras aplicações de intensidade de fluorescência empregam uma mudança na emissão de fluorescência ou um aumento de fluorescência ao interagir com uma molécula de interesse para detectar uma molécula específica. As aplicações típicas de fluorescência detectadas por um leitor de placa de fluorescência são as seguintes:
Ensaios de viabilidade celular Ensaio de resazurina, Calceína-AM Ensaios de agregação Thioflavin T (RT-QuIC) Enzyme activity assays 4-metilumbeliferona (4-MU), ensaios baseados em NADH, 7-Amino-4-Metilcumarina (AMC) Reactive oxygen species H2DCFDA assay, DCF assay Quantificação de ácido nucleico Ensaios Qubit, ensaios Quant-iT (por exemplo, PicoGreen) -
Luminescência (incl. BRET)
A emissão de luz sem excitação prévia é referida como luminescência. A produção de luminescência em experimentos de ciências da vida ocorre como resultado de uma reação química e é espontânea ou precisa de catálise enzimática. Em uma reação de luminescência espontânea, o substrato e os cofatores precisam estar presentes para gerar luz. Para uma reação de luminescência dependente de enzima, uma enzima funcional é essencial. Essa enzima é chamada luciferase. Para detectar a luz emitida de um ensaio de luminescência em um leitor de placas, é necessário um detector. Normalmente, toda a luz proveniente de um poço é agrupada por uma lente e guiada para o detector. Consequentemente, um leitor de placa de luminescência não depende de filtros ou de uma fonte de excitação. Para ensaios de dupla emissão, a seleção do comprimento de onda é realizada por meio de filtros ou monocromadores. Este modo de detecção muito sensível é usado para estudar os seguintes modos:
Ensaios de viabilidade celular CellTiterGlo ensaios de repórter Ensaio de repórter de luciferase dupla Receptor-ligando-ligação Ensaios baseados em BRET -
Fluorescência Polarizada
Outro modo de detecção baseado em fluorescência usa luz polarizada para excitar a molécula fluorescente. A mudança de polarização da luz emitida é determinada medindo a emissão no plano paralelo e perpendicular em relação ao plano de polarização de excitação. Alterações na polarização da fluorescência resultam de diferenças nos pesos moleculares. Moléculas pequenas e leves se movem rapidamente e despolarizam a emissão de fluorescência, enquanto moléculas maiores se movem lentamente e retêm a polarização da fluorescência. Este princípio permite estudar o seguinte:
Ensaios de ligação competitiva Detecção de nucleotídeos para relatar as atividades enzimáticas Ensaios transcreener -
AlphaScreen
A tecnologia AlphaScreen (Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay) usa esferas que liberam oxigênio singleto quando excitadas com luz vermelha (680 nm). As moléculas de oxigênio singleto movem-se até 200 nm e reagem com o tioxeno em uma reação quimioluminescente. Outras transferências de energia levam a sinais de luminescência ampla entre 520 e 620 nm ou a sinais com comprimentos de onda discretos. Se esferas doadoras (liberação de oxigênio singleto) e esferas aceitadoras estiverem próximas, um sinal luminescente é emitido e pode ser detectado pelo leitor. Esses grânulos geralmente são reunidos por anticorpos que se ligam especificamente ao mesmo analito ou que são acoplados a moléculas que interagem entre si. Para a detecção AlphaScreen em um leitor de placas, a excitação em 680 nm é combinada com uma leitura de luminescência que é atrasada no tempo, em comparação com a excitação. O AlphaScreen é frequentemente usado para aplicativos de alto rendimento que estudam o seguinte:
Proteína, quantificação de citocinas ensaios AlphaLISA Fosforilações de proteínas ensaios Alpha SureFire Interações proteína-proteína ensaios AlphaScreen -
Nefelometria
A nefelometria é uma técnica usada para medir a quantidade de turbidez em uma solução causada pela presença de partículas insolúveis suspensas. Quando direcionada através de uma solução contendo partículas sólidas suspensas, a luz é transmitida, absorvida e espalhada (refletida pelas partículas). A nefelometria quantifica diretamente a intensidade da luz espalhada por partículas insolúveis na amostra. Um nefelômetro é um leitor que contém uma fonte de luz, um detector disposto em ângulo reto com o feixe de luz e entre um coletor óptico de dispersão de luz. Este princípio permite estudar o seguinte:
Solubilidade de drogas crescimento microbiano -
Fluorescência Resolvida no Tempo
A fluorescência resolvida no tempo (TRF) é um método baseado na fluorescência que requer a excitação da amostra em um comprimento de onda específico e a detecção da fluorescência emitida em um comprimento de onda diferente. Em comparação com a intensidade de fluorescência convencional, a emissão dura um milissegundo em vez de um intervalo de nanossegundos. Isso é possível graças aos lantanídeos, terras raras com características de fluorescência de longa vida. Os leitores medem o sinal de emissão com um atraso para a excitação, evitando a detecção de background e autofluorescência. TRF é empregado para estas aplicações:
Ensaios metabólicos sondas solúveis para medidas de acidificação extracelular e consumo de oxigênio Quantificação de biomoléculas e proteínas Imunoensaio, DELFIA -
TR-FRET
FRET Resolvido no Tempo (TR-FRET) é uma tecnologia de detecção que combina a fluorescência resolvida no tempo (TRF) com a transferência de energia de ressonância (FRET) de Förster. O TR-FRET é usado principalmente para analisar eventos de ligação e para triagem de drogas de alto rendimento (High Throughput Screening). FRET descreve uma transferência de energia entre dois fluoróforos. A transferência depende da proximidade espacial entre doador e receptor e da sobreposição entre a emissão do doador e o espectro de excitação do receptor. Os kits TR-FRET incluem HTRF, Lanthascreen, Transcreener e THUNDER e são empregados para estas aplicações:
Estudos de ligação Ensaios baseados em TR-FRET
Nossos leitores monomodo
Esses leitores de microplacas podem medir apenas um modo de detecção (tipicamente absorção, luminescência ou intensidade de fluorescência). Esses leitores são a melhor escolha quando já está claro que o instrumento será utilizado para apenas uma aplicação. Essas tarefas são normalmente ensaios de longo prazo que impedem o uso do leitor de microplacas para outras medições. Portanto, um modo de detecção é suficiente. Exemplos de tais estudos são o monitoramento do crescimento microbiano que leva um ou mais dias, ou experimentos de tioflavina T que levam até 7 dias. Um único modo de detecção satisfaz seu laboratório se você puder realizar todos os seus ensaios neste modo específico. Por exemplo, com leitores de absorbância você poderá medir atividades enzimáticas, quantidade de DNA e proteínas, viabilidade celular e muito mais. No entanto, você está limitado a ensaios que podem ter menor sensibilidade ou especificidade do que ensaios que empregam outros modos de detecção. Se você atualmente planeja aplicações com base apenas em um modo de detecção, mas não tem certeza sobre o futuro, procure leitores de placas que possam ser posteriormente atualizados para instrumentos multimodo.
LUMIstar Omega
SPECTROstar Omega
NEPHELOstar Plus
Nossos leitores multimodo
Instrumentos capazes de ler dois ou mais modos de detecção são chamados de leitores de microplacas multimodo. Normalmente, os leitores multimodo incluem absobância, intensidade de fluorescência e luminescência e, possivelmente, modos de detecção avançados. Eles oferecem uma maior flexibilidade em relação aos ensaios que são possíveis de ler. Os leitores multimodo são recomendados sempre que muitos usuários trabalham com o instrumento, quando seus aplicativos mudam de projeto para projeto ou, se você já sabe que precisa ler ensaios com diferentes modos de detecção. Além disso, um leitor de placas multimodo é mais econômico do que vários leitores dedicados de modo único.
PHERAstar FSX
CLARIOstar Plus
VANTAstar
Omega Series
Qual placa eu normalmente uso?
6 até placas de 96 poços
Image ©Greiner Bio-One GmbH
Placas de 384 poços
Image ©Greiner Bio-One GmbH
Placas de 1536 e 3456 poços
Image ©Greiner Bio-One GmbH
Placa Lvis
Quais recursos de qualidade são mais importantes para mim?
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Sensibilidade
Os leitores de microplacas com a maior sensibilidade permitem que você leia intensidades de sinal muito baixas e tenha uma melhor resolução de sinais dentro de sua janela de ensaio. Isso é mais importante se o controle negativo e o positivo estiverem próximos. Um leitor altamente sensível é obrigatório para ensaios com uma janela de ensaio muito pequena.
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Flexibilidade
Leitores com alta velocidade de detecção são recomendados para medir placas de alta densidade (placas de 1536 e 3456 poços), para escaneamaneto em alto rendimento (High Throughput Screening) ou se resolução temporal alta for necessária para resolver eventos rápidos (por exemplo, sinalização de segundo mensageiro).
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Velocidade
Se suas necessidades mudarem durante ou entre os projetos, um leitor de microplacas que oferece inúmeras possibilidades é altamente recomendado. Considere a capacidade de alternar os modos de detecção, alternar facilmente entre a leitura superior e inferior ou selecionar comprimentos de onda nos modos de absorbância, fluorescência e luminescência sem a necessidade de comprar ou instalar filtros. Esses recursos são normalmente fornecidos por leitores de placas multimodo baseados em monocromador. Leitores com monocromadores permitem, além disso, a varredura em uma gama ampla de comprimento de onda.
Quais acessórios eu preciso?
Os acessórios do leitor de microplacas ampliam as capacidades do seu instrumento. Funcionalidades adicionais específicas são necessárias para certas aplicações, como ensaios de células vivas, leituras de médio volume ou baixo volume.
Atmospheric Control Unit
Evaluation Plate
Filters
LVis Plate
Microplate Stacker
THERMOstar
Qual é o meu orçamento?
Quando se trata da decisão de comprar um leitor de microplacas, é claro que o orçamento desempenha um papel importante.
O preço de um leitor de microplacas depende do equipamento técnico e do número de modos de detecção que o dispositivo pode medir. A faixa de preço de um leitor começa em 2.500 euros/dólares para um simples leitor de microplacas ELISA baseado em filtros e pode chegar a mais de 150.000 euros/dólares para um leitor de microplacas multimodo de ponta com vários modos de detecção e a melhor tecnologia para maior sensibilidade e tempos de leitura mais rápidos.
Mas tome cuidado com a sua escolha e não considere apenas as suas necessidades atuais, mas também as futuras necessidades para o leitor de placas.
Fique de olho na possibilidade de atualizar seu leitor de microplacas com recursos adicionais ou modos de detecção a qualquer momento. Se você tiver a chance de atualizar mais tarde, não precisará comprar um leitor de microplacas adicional para aplicações futuras. Isso economiza não apenas dinheiro e espaço útil em seu laboratório, mas também tempo que você economizará para se acostumar com um novo leitor de placas ou nova marca.
Além dos custos do próprio leitor de microplacas, esteja ciente de possíveis custos ocultos adicionais, por exemplo, taxas de manutenção, suporte, atualizações de software e licenças ou pacotes de reagentes agrupados.
Lembre-se também de que, embora os leitores baseados em filtro sejam geralmente mais baratos do que os instrumentos baseados em monocromador, você precisa comprar filtros diferentes para outros comprimentos de onda. Certifique-se de levar em consideração esses custos também.
Por que escolher um leitor de microplacas BMG LABTECH?
A BMG LABTECH é especializada na produção apenas de leitores de microplacas e traz mais de 30 anos de experiência em tecnologia de leitura de placas. Esse conhecimento fica visível nos resultados que nossos instrumentos entregam - o único fator que conta em seu laboratório! Os usuários do BMG LABTECH podem confiar para obter os melhores resultados em sensibilidade, velocidade e flexibilidade. Além disso, nossos leitores de microplacas multimodo são desenvolvidos para fornecer desempenho ideal por anos. Nossos instrumentos são desenvolvidos, produzidos e testados na Alemanha e são construídos para serem extremamente robustos e confiáveis.
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Devido à sua modularidade, todos os nossos leitores de placas de fluorescência podem ser equipados com diferentes modos de detecção e abrangem uma infinidade de aplicações. Recursos adicionais podem ser atualizados a qualquer momento. Isso lhe dá a chance de manter suas opções em aberto, mesmo que você não use todo o escopo do seu leitor de microplacas imediatamente.
Serviço e suporte completos
Nós nos esforçamos para fornecer a você o melhor atendimento ao cliente. Todos os representantes da área de vendas são especialistas técnicos altamente treinados, capazes de dar suporte a hardware, software e à maioria das questões de aplicação. Para as soluções de aplicações mais complexas, uma equipe dedicada de especialistas em aplicações também está disponível.
Pacote de software multiusuário
Todos os nossos instrumentos vêm com um pacote de software multiusuário que pode ser instalado em quantos computadores o usuário desejar, sem a necessidade de adquirir licenças. As atualizações de software para nossos leitores de microplacas são gratuitas nos primeiros 12 meses após a compra.